yy.vip易游-安捷伦 1290 Infinity III LC 液相色谱系统

　　YYVIP易游·(中国有限公司)官方网站-Agilent Infinity III液相色谱通过智能化的功能模块，以交互的方式协助用户更好的使用液相色谱系统，自动完成实验室的日常操作，提供维护及故障排除的指导支持，最大化的帮助实验人员简化操作，提高仪器稳定运行的时间。同时，Agilent Infinity III液相色谱凭借完美匹配的仪器、色谱柱和备件，为您提供值得信赖的坚固质量和可靠结果。InfinityLab 产品系列为协同工作而精心设计，帮助您改善工作流程，提高分析效率并降低操作成本。 （1）协助处理日常工作： Agilent 1290 Infinity III 液相色谱仪和 Agilent 1260 Infinity III 液相色谱仪配备全新的智能工具，可帮助您简化从系统和溶剂管理到样品追踪的繁琐手动任务。 （2）可靠的结果： 安捷伦在液相色谱领域拥有 50 多年的专业经验，我们的仪器一直被您的同行评为高度可靠之选，值得您的信赖。 （3）投资保护： 轻松自在地升级。所有基于 1290 和 1260 Infinity III 液相色谱的仪器均与上一代产品兼容，可根据需要进行无缝升级和技术更新。 （4）可持续发展： 优化实验室空间并减少水、溶剂和能源消耗，同时大幅减少浪费。Agilent InfinityLab 液相色谱解决方案经 My Green Lab 认证，让您全面了解每套系统对坏境的影响。

　　安捷伦 1290 Infinity III LC 液相色谱系统是一种超高效液相色谱 (UHPLC) 系统，专为分析型液相色谱仪器和实验室实现高效率工作而设计。它可以提供更宽的性能范围，支持高达 1300 bar 的压力和高达 5 mL/min 的流速，使色谱柱可以灵活地用于 UHPLC 和 HPLC 应用。这款系统非常耐用，并具有出色的分离和检测性能，可确保数据拥有高质量。

　　该 UHPLC 系统的低扩散性有利于提供出色的分离度，极低的残留可保障液相色谱数据的可靠性，同时具有独特的高灵敏度检测能力。它支持无缝集成到现有的实验室基础设施中，有利于通过智能系统模拟技术 (ISET) 从安捷伦其他设备或第三方设备平稳地转移方法，提高分析效率并降低使用维护成本。

　　作为一款灵活的高端 UHPLC 系统，安捷伦 1290 Infinity III LC 液相色谱系统可运行任何 UHPLC 或 HPLC 方法。特征包括更宽的性能范围和温度范围、可自动扩展的进样范围以及梯度选项。

　　协助您的日常 HPLC 工作：Agilent InfinityLab Assist 使您能够简化日常任务和繁琐的手动流程，并随时随地掌控液相色谱的工作状态。

　　不会再出现溶剂耗尽的情况：Agilent InfinityLab 液位感应可监测溶剂瓶中的液体量，预测是否有足够的流动相用于下一个序列，并在液量不足时发出提醒，避免成本高昂的重新分析。

　　轻松定位样品瓶：Agilent InfinityLab 样品 ID 读取器可让仪器无需手动输入样品瓶位置也可以定位样品，进一步提升可靠性。仪器系统会自动为您确认样品 ID 和样品瓶位置。

　　超快速梯度：低至 10 L 的最小延迟体积，使您可以在窄径色谱柱上运行超快速梯度洗脱，使该 UHPLC 泵完全适合作为 LC/MS 应用的前端。

　　高载样量，更快速的进样周期：在标准安捷伦液相色谱堆栈的体积内可容纳多达 6144 个样品，提升单位实验台空间的样品容量。双针头进样缩短进样周期，获得更高的样品通量。

　　超低的交叉污染：1290 Infinity III Multisampler 具有多重清洗功能，可将残留进一步降至 10 ppm 以下，即使用于氯己定等棘手化合物，数据质量也丝毫不受影响。

　　出色的色谱柱操作和温度控制：1290 Infinity III 高容量柱温箱能够在宽温度范围内提供精确的温度控制，可冷却至环境温度以下 20 °C，并加热至 110 °C。MCT 柱温箱可容纳最多八根色谱柱。

　　提供多种检测器：可选择 1290 Infinity III 二极管阵列检测器 (DAD) 和可变波长检测器 (VWD)。对于更特殊的应用，还可以使用荧光检测器 (FLD)、示差折光检测器 (RID) 或蒸发光散射检测器 (ELSD)。1290 Infinity III 液相色谱系统还可与多种质谱仪联用。

　　1290 Infinity III 高通量系统是您进行分析的理想选择，通过安捷伦四极杆、TOF、TQ 或 Q-TOF 检测技术，对分子量和结构进行快速灵敏的 LC/MS 测定。

　　通过水中 PFAS 的 LC/MS/MS 分析 eMethod可对饮用水和废水中的 100 种天然和同位素标记的全氟和多氟烷基化合物 (PFAS) 进行可靠的 UHPLC 痕量检测。通过我们的消耗品订购指南了解更多有关我们完整的单一供应商解决方案的信息，实现水中 PFAS 的提取、定量分析和报告。

　　APIs 和药品中的致突变亚硝胺杂质即使含量很少，也会对健康和安全构成重大风险。痕量亚硝胺的检测和定量具有挑战性，尤其当亚硝胺杂质与 APIs 结构相似时。采用三重四极杆质谱检测的安捷伦 1290 Infinity III LC 液相色谱系统具有高灵敏度，对亚硝胺杂质具有低检出限。

　　本应用简报针对 2025 版《中国药典》2341 和 0212 公示稿的内容，介绍了关于 43 种禁用农药和 31 种限用农药残留的检测方法和部分方法学验证结果。选取麦冬、人参、陈皮、甘草、菊花、党参等基质，采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 和 Agilent Bond Elut HLB SPE 净化柱进行样品前处理，随后进样至 LC-MS/MS 系统进行分析。实验结果表明，该方法线性良好，所考察的目标化合物的线；对于六种不同的药材基质，通过两种样品前处理方法所得到的目标化合物回收率均满足要求 (60%–130%)；且稳定性考察结果表明，目标化合物的峰面积偏差均在 ±15% 以内，满足药典要求。

　　本文参照《食品安全国家标准 食品中低聚半乳糖的测定》(GB 5009.289-2023)，建立了一种测定食品中低聚半乳糖的高效液相色谱方法。该方法使用 UHPLC-FLD 检测器与 Agielnt AdvanceBio 糖谱分析色谱柱 (4.6 × 150 mm, 2.7 μm)，检测食品中的低聚半乳糖含量。该方法在 10 µg/mL–500 µg/mL 浓度范围内具有良好的线性；峰面积重复性良好（相对标准偏差小于 2.0%）；且实测结果与样品中的实际添加量一致，适用于准确测定婴幼儿配方食品（不包括特殊医学用途婴儿配方食品）、婴幼儿辅助食品、乳制品、饮料、焙烤食品中的低聚半乳糖。

　　使用超高效液相色谱法 (UHPLC) 快速测定奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的含量

　　本应用简报介绍了一种利用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 超高效液相色谱 (UHPLC) 系统和 Poroshell 120 CS-C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) 色谱柱对奶粉中的添加剂香兰素、甲基香 兰素、乙基香兰素和香豆素进行定量的快速分析方法。该方法采用乙腈和 0.5% 甲酸水溶 液作为流动相，以梯度方法在 5 分钟内即可完成对香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和 香豆素的检测。与我国《食品安全国家标准 食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和 香豆素的测定》(GB 5009.284-2021) 中的第一法“液相色谱法”相比，分析时间更短， 灵敏度更高，且方法重现性好，适用于快速检测奶粉中的香兰素、甲基香兰素、乙基香 兰素和香豆素四种添加剂。

　　本应用简报针对 2025 版《中国药典》2342 和 0212 的要求，介绍了关于 59 种植物生长调节剂残留量的分析方法以及部分方法学验证结果。选取麦冬和红参基质，采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 进行样品前处理，然后通过 LC-MS/MS 系统进行检测。实验结果表明，该方法线性范围较宽，且灵敏度出色；对于两种不同的药材基质，利用基于两种净化吸附剂配比的样品前处理方法所得到的目标化合物的回收率均满足要求 (60%–130%)，且表现出良好的稳定性。

　　使用 LC/MS/MS 对 API 及 40 mg 片剂中的致突变性 NDSRI N-亚硝基进行高灵敏度定量分析

　　亚硝胺杂质是致突变性杂质，根据 ICH M7 指南分类为“关注队列”(cohorts of concern)，必须受到控制以保证患者安全摄入药物。亚硝胺药物成分相关杂质 (NDSRI) 是一类与 APIs 结构相似的亚硝胺杂质，可在药品生产或储存期间生成。自 2018 年以来，发生了多起因亚硝胺杂质高于可接受摄入量导致的药品召回。自 2021 年 7 月以来，发生了多起因特定亚硝胺药物成分相关杂质 (NDSRI) 导致的若干种药品召回。近期一个例子是加拿大辉瑞召回了若干种剂量的片剂，因含有的 N-亚硝基高于可接受摄入量。因此，有必要开发一种高灵敏度的 LC/MS/MS 方法，来定量分析 API 及片剂中的 N-亚硝基。本应用简报介绍了一种使用 Agilent 6470 LC/TQ 的高灵敏度 LC/MS/MS 方法，对 N-亚硝基的定量限为 25 pg/mL，并建立了所有关键的方法性能相关参数，可用于分析 API 及片剂。

　　本应用简报针对 2025 版《中国药典》2341 和 0212 公示稿的内容，介绍了关于 43 种禁用农药和 31 种限用农药残留的检测方法和部分方法学验证结果。选取麦冬、人参、陈皮、甘草、菊花、党参等基质，采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 和 Agilent Bond Elut HLB SPE 净化柱进行样品前处理，随后进样至 LC-MS/MS 系统进行分析。实验结果表明，该方法线性良好，所考察的目标化合物的线；对于六种不同的药材基质，通过两种样品前处理方法所得到的目标化合物回收率均满足要求 (60%–130%)；且稳定性考察结果表明，目标化合物的峰面积偏差均在 ±15% 以内，满足药典要求。

　　本文建立了啤酒中五种氯苯酚类物质的快速分析方法。该方法采用 Agilent 1290 II UHPLC 系统，结合 Poroshell 120 Bonus-RP 色谱柱，对五种氯苯酚类物质进行快速分离。结果显示，各氯苯酚类物质标准品在峰形、分离度、灵敏度等指标上满足液相色谱分离和定量分析要求；同时，啤酒样品中各氯苯酚类物质的色谱峰不受其他成分干扰。方法学研究表明，本文建立的氯苯酚类物质液相色谱快速分析方法，能够实现啤酒样品中氯苯酚类物质的准确分离和定量。另外，仪器配置的二极管阵列检测器 (DAD) 可用于采集各氯苯酚类物质的全光谱，且 DAD 的光谱鉴定功能（例如峰纯度技术）可实现对分析物的初步定性鉴别。

　　采用 Agilent Bond Elut PFAS WAX 固相萃取柱和 Poroshell 120 色谱柱对 食品中的合成着色剂进行分析

　　本应用简报参考《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》(GB 5009.35-2023) 中11 种合成着色剂的测定方法，选择桃干、火腿、腊肉和糕点 4 种不同类型的食品样品基质，采用 Agilent Bond Elut PFAS WAX 固相萃取小柱进行富集和净化，并通过 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱对食品中的合成着色剂进行分离，建立了一种仅需 15 min 的快速分析方法。该方法能完全复现 GB 5009.35-2023 的样品前处理方法，具有良好的准确度和精密度；且在 0.1–10.0 μg/mL 浓度范围内表现出优异的线性。结果表明，该方法满足现行国标方法要求，尤其适用于样品检测需求较大的实验室。

　　本文参照《食品安全国家标准 食品中低聚半乳糖的测定》(GB 5009.289-2023)，建立了一种测定食品中低聚半乳糖的高效液相色谱方法。该方法使用 UHPLC-FLD 检测器与 Agielnt AdvanceBio 糖谱分析色谱柱 (4.6 × 150 mm, 2.7 μm)，检测食品中的低聚半乳糖含量。该方法在 10 µg/mL–500 µg/mL 浓度范围内具有良好的线性；峰面积重复性良好（相对标准偏差小于 2.0%）；且实测结果与样品中的实际添加量一致，适用于准确测定婴幼儿配方食品（不包括特殊医学用途婴儿配方食品）、婴幼儿辅助食品、乳制品、饮料、焙烤食品中的低聚半乳糖。

　　使用超高效液相色谱法 (UHPLC) 快速测定奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的含量

　　本应用简报介绍了一种利用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 超高效液相色谱 (UHPLC) 系统和 Poroshell 120 CS-C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) 色谱柱对奶粉中的添加剂香兰素、甲基香 兰素、乙基香兰素和香豆素进行定量的快速分析方法。该方法采用乙腈和 0.5% 甲酸水溶 液作为流动相，以梯度方法在 5 分钟内即可完成对香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和 香豆素的检测。与我国《食品安全国家标准 食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和 香豆素的测定》(GB 5009.284-2021) 中的第一法“液相色谱法”相比，分析时间更短， 灵敏度更高，且方法重现性好，适用于快速检测奶粉中的香兰素、甲基香兰素、乙基香 兰素和香豆素四种添加剂。

　　着色剂，是一类化学染色剂，添加到化妆品中起增色作用，然而以颜料橙和苏丹红等为代表的这一类着色剂具有很强的致癌性。《化妆品卫生规范》（2015 年版）中对多种着色剂有着明确的限量规定。 实验结果表明本方法对 5 种着色剂具有良好的分离度。实际样品测试表明，本方法可以避免其他组分杂质的干扰，标准曲线 以上，回收率满足国标规定，本方法可作为化妆品中 5 种禁用着色剂测定的重要参考方案。

　　应用配备 Agilent Poroshell 色谱柱的 Agilent 1290 Infinity LC 在 2 min 内同时测定八种有机紫外线吸收剂

　　FDA 与欧洲药典（EP）中都规定了个人护理产品中紫外线吸收剂的含量水平。液相色谱法（LC）是用于紫外线吸收剂定性和定量分析的被广泛认可的分析技术。大多数此类分析的传统 LC 方法一次运行需约 20-25 min。在此应用报告中，采用配有 Agilent Poroshell 色谱柱的 Agilent 1290 Infinity LC，开发了一种快速、灵敏、耐用和具有良好分辨率的分 析方法，可在 99 s 内分离 8 种 FDA/EP 收载的紫外线吸收剂成分。重复进样保留时间的标准偏差（SD）及相对标准偏差（RSD）值证实了 Agilent 1290 Infinity 二元泵具有的优良性能。极小的峰面积 RSD 值及有机紫外线 ng 载样量的宽线性范围展现了 Agilent 1290 Infinity 二极管阵列检测器的卓越性能。此外，该方法可有效鉴别 6 种国际个人护理产品中的活性紫外线吸收剂。

　　利用离子对 dMRM LC/QQQ 对源自肠 道菌群的吲哚代谢物进行定量分析

　　摘要 随着人体肠道菌群在健康和疾病研究中的作用受到越来越多的关注，对不同化学类别的菌群代谢物的定量分析需求也应运而生。安捷伦开发出一种高重现性、稳定的离子对反相 (IP-RP) 动态多反应监测 (dMRM) 方法，该方法可高效分离 200 多种中心碳代谢物。本应用简报重点介绍了将 IP-RP dMRM 方法扩展到与宿主代谢和免疫通路相关联的色氨酸和吲哚代谢物的测量。扩展的 IP-RP dMRM 方法能够在宽动态范围内灵敏地检测相关生物样品中的这些化合物。

　　根据 EPA 方法 1633 分析水样中的全氟和多氟烷基化合物 (PFAS)

　　美国 (US) 国家环境保护局 (EPA) 方法 1633[1] 是一种用于检测和定量分析许多基质（包括废水、土壤、固体和组织）中的全氟/多氟烷基化合物 (PFAS) 的分析方法。之前的应用简报[2] 使用了现有的固相萃取 (SPE) 技术并突出展示了安捷伦仪器性能。本应用简报介绍了使用 Agilent Bond Elut PFAS WAX SPE 小柱，按照 EPA 方法 1633 对废水样品中的 PFAS 进行检测。分析仪器采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱 (LC) 系统与 Agilent 6470 三重四极杆 (TQ) 质谱仪的联用系统 (LC/TQ)。本研究在分析物萃取回收率、灵敏度（方法检出限）和重现性方面对方法性能进行了验证。

　　黄嘌呤类药物（Xanthines）是一类以黄嘌呤为基本结构的生物碱类药物，其分子由咪唑环与嘧啶环骈合构成，含有四个氮原子。代表药物包括和茶碱，可通过口服、直肠或非肠道途径吸收，并可快速分布于中枢神经系统、唾液及乳汁中。 该类药物具有中枢兴奋、心脏兴奋、平滑肌松弛、利尿及骨骼肌兴奋等作用。小剂量可兴奋大脑皮层减轻疲劳，大剂量则引发紧张失眠；通过扩张外周血管降低阻力。临床主要用于严重传染病或中枢抑制药中毒导致的昏睡、呼吸循环抑制，常与麦角制剂联用治疗头痛，或与溴化物合用缓解神经官能症。不良反应较少，大剂量可引起心悸、呕吐甚至惊厥，婴儿高热时禁用含复方制剂，消化性溃疡患者及孕妇需慎用。1. 检测样品本实验以含黄嘌呤类生物碱的天然产物为分析对象，主要包括：? 咖啡豆提取物? 茶叶提取物? 可可豆提取物这些样品代表黄嘌呤类化合物在食品中的主要来源，具有广泛的代表性。2. 检测项目检测目标为6种黄嘌呤类生物碱及其代谢产物：? 1-甲基黄嘌呤? 可可碱? 茶碱? β-羟乙基茶碱? 3-丙基黄嘌呤? 这些化合物是食品、饮料中重要的活性成分，其含量直接影响产品品质。3. 参考标准基于文献研究优化方法。4. 检测仪器安捷伦1290高效液相色谱系统，配备：? 二元泵系统? 自动进样器? 柱温箱? 二极管阵列检测器5. 实验内容样品前处理：? 准确称取研磨均匀的植物样品（咖啡豆、茶叶或可可豆）0.5 g；? 加入50 mL 80°C热水，超声提取30分钟；? 冷却后离心取上清液，经0.45 μm微孔滤膜过滤；? 适当稀释后进样分析。测试条件：? 色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6 × 150 mm, 5 μm）? 流动相：水-甲醇（85:15, v/v）? 流速：1.0 mL/min? 检测波长：274 nm? 柱温：30°C? 进样量：10 μL? 运行时间：15分钟结果分析：? 记录各化合物的保留时间、峰面积和峰高；计算理论塔板数（N）和USP拖尾因子（TF）；? 通过与标准品比对进行定性定量分析；绘制标准曲线计算样品中各组分的含量。? Eclipse Plus C18色谱柱对所有黄嘌呤化合物均表现出优异的分离效果；理论板数达到14500-15600， USP拖尾因子接近理想的1.00（范围1.00-1.11）；更尖锐的色谱峰带来更高的检测灵敏度，有利于微量成分的准确测定；? 该方法重现性好，适用于各类植物样品中黄嘌呤类化合物的快速检测。注：1. 1-甲基黄嘌呤 2.可可碱 3. 茶碱 4. β-羟基乙基茶碱 5. 3-丙基黄嘌呤 6. 结论采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱的HPLC方法，在黄嘌呤类生物碱分析中展现出卓越的色谱性能。其高理论板数和接近理想的峰形，为食品、饮料中此类活性成分的准确测定提供了可靠技术支撑，特别适用于品质控制和成分分析等应用场景。

　　1. 检测样品本实验以植物油为检测对象，包括葵花籽油、菜籽油和橄榄油等常见食用油脂。样品通过溶剂提取法进行前处理，以提取其中添加或天然存在的抗氧化剂成分。此外，还制备了加标样品以验证方法的准确性与回收率。2. 检测项目检测项目包括10种常用合成抗氧化剂：没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）、去甲二氢愈创木酸（NDGA）、丁基羟基茴香醚（BHA）、 Ionox-100、十二烷基没食子酸（DG）、丁基羟基甲苯（BHT）、抗坏血酸棕榈酸酯（AP）等。这些抗氧化剂常用于延缓油脂氧化，但其使用受到国内外法规的严格限制。3. 参考标准本方法参考了欧洲与美国对食品中抗氧化剂的限量规定，并在文献基础上进行优化。4. 检测仪器实验使用安捷伦1290 Infinity 高效液相色谱系统，具体配置如下：? 二元泵（G4220A）? 自动进样器（G4226A）? 柱温箱（G1316C）? 二极管阵列检测器（G4212A）该系统具备高压力耐受性与快速检测能力，适用于高通量分析。5. 实验内容样品前处理：准确称取1 g植物油样品，加入10 mL含柠檬酸（1 mg/mL）和异抗坏血酸（1 mg/mL）的甲醇溶液，涡旋混合30秒，静置2分钟后再次涡旋30秒，随后以5000 × g离心5分钟，取上清液进样。测试条件：? 色谱柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18（50 mm × 2.1 mm, 1.8 μm）? 流动相：A为0.02%磷酸水溶液，B为乙腈/甲醇（75/25, v/v）? 流速：1.9 mL/min? 梯度程序：0–1.6分钟内B相由30%升至100%? 柱温：45°C? 进样量：2 μL? 检测波长：酚类抗氧化剂为280 nm，AP为255 nm，参比波长400 nm? 检测频率：80 Hz数据处理：通过标准溶液建立校准曲线 μg/mL，所有目标物R2 ≥ 0.999。重复性测试显示RSD值在0.16%–0.99%之间，方法检测限低于0.1 μg/mL，相当于样品中约1 mg/kg。结果分析：在1.5分钟内完成10种抗氧化剂的分离，系统压力为1120 bar。加标回收率在74.4%–109.3%之间，多数抗氧化剂在三种植物油中的回收率接近100%，表明方法具有良好的准确性与适用性。尽管橄榄油基质干扰较多，但未影响目标物的定性与定量。本文系统介绍了从样品前处理到仪器分析的全过程，展示了Agilent 1290 Infinity LC在快速、准确测定植物油中抗氧化剂方面的优异性能，适用于食品质量控制与合规性检测等高通量应用场景。

　　操作便捷性突出，柱温箱温控调节精准且稳定，复杂样品分析时峰形始终规整，目标物分离效果稳定可靠。

　　操作软件OpenLab界面设计人性化，功能分区清晰，方法编辑和数据处理步骤简洁，新手快速熟悉后就能独立操作。

　　仪器的抗干扰能力较强，在多台仪器同时运行的实验室环境中仍能稳定工作，基线平稳，不会因环境干扰影响低浓度样品的检测准确性。

　　自动进样器操作省心，进样动作精准规范，即使处理小体积样品也能保证结果一致性，且样品间交叉污染控制到位，无需频繁清洗维护。

　　在药物残留检测等专业场景中，该仪器对结构相似的杂质分离效果出色，且与质谱联用的接口设计成熟，切换联用模式时操作顺畅，适配性强。

　　仪器操作便捷、界面友好，长期使用稳定性和耐用性都很出色，虽然初期投入不低，但后期维护成本可控，是实验室的可靠装备。

　　高性能设备，灵敏度高，可靠且高效。操作简便，易上手，可适用于各类分析任务。

　　肽图法鉴别抗体偶联药物1.检测样品：抗体偶联药物2.检测项目：肽图鉴别，肽图色谱法基于疏水相互作用分离蛋白质。该分析方法使用蛋白酶(例如,胰蛋白酶)进行蛋白消化(蛋白酶特异性裂解) ,随后通过反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分离肽片段。通过目视对比样品和对照品中的肽峰,评估鉴别。3.参考标准：抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则4.检测仪器：安捷伦液相12905.内容5.1色谱条件色谱柱 ：Waters BEHC18, 1.7 μm, 2.1 × 100 mm (P/N 186002352) 流速0.5 mL/分钟进样体积20μL柱温60℃自动进样器温度5℃运行时间150分钟波长214 nm采样频率/信号峰宽 2.5HZ运行梯度时间[min]A（0.1%TFA）B（0.1%乙腈）09552.075.80.1955909555.2 样品前处理： (1) 向参比品、空白和样品（2mg/mL）各 500 μL中加入 10 μL 1 MDTT. (2) 短暂涡旋，并离心。 (3) 在 37°℃ 孵育 30分钟。 (4) 在孵育样品时，通过以下方式平衡 NAP-5 色谱柱： a. 取下顶盖和底盖。 b. 加入过量液体，使流过色谱柱。 c. 使用2.5 mL消化缓冲液,冲洗色谱柱4次(通常并非所有步骤均可在 30 分钟内完成，可在步骤（8）继续平衡） (5) 在步骤(3)的制备液中加入 25 μL 1 M IAM 储备液。 (6) 短暂涡旋，并离心。 (7)在环境温度下避光孵育 30 分钟（例如，使用铝箔包裹）。(8)在孵育样品时，可继续进行步骤(6)的 NAP-5 色谱柱平衡。 (9) 在步骤(7)的各孵育体系中加入5μL 1 M DTT储备液。 （10） 短暂涡旋，并离心。 (11)移取500μL已完成还原和烷基化的混合物，加至NAP-5色谱柱中，使液体通过色谱柱排出（流穿液为废液）。 (12)将NAP-5色谱柱置于新的 1.5 mL离心管中，加入1mL消化缓冲液，从色谱柱中洗脱,采集样品至离心管中。(检查洗脱体积-预期体积为 1 mL） （13） 短暂涡旋，并离心。 (14)将200μL洗脱液转移至新的离心管中。 (15)向上述步骤(14)的200μL R/A样品中加入6μL 2 μg/μL胰蛋白酶溶液。(16)短暂涡旋。(17)在25℃±1℃孵育 18小时。(18) 加入4μL TFA终止消化。(19) 短暂涡旋。(20)将制备液转移至HPLC小瓶中。5.3 实验结果：样品可接受标准：在214nm波长处，样品进样得到的图谱在峰分布，保留时间，相对峰高和所有峰型方面必须与参比品具有目视可比性。典型图谱如下。